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中医学----谈麋鹿角不同部位对肾阳虚证大鼠的作用

来源: 长沙中视澜庭教育咨询有限公司  日期:2018-02-25 08:56:57  点击:109 
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麋鹿角为麋鹿Elaphurus davidianus Milne-Edwards 的雄鹿已骨化的角,入药历史悠久,具有滋阴壮阳、强筋骨、益血脉等作用。本文采用氢化可的松致大鼠肾阳虚模型,研究麋鹿角不同提取部位的补阳作用,为麋鹿角活性部位的确定及其功效物质基础研究提供科学依据。本实验从一般状况、内分泌系统、免疫系统及血液中的环核苷酸四方面研究了麋鹿角不同部位对氢化可的松肾阳虚证大鼠的影响,初步探讨其作用机制。

  1 材料与方法
  1. 1 试验药物麋鹿角,由江苏省大丰麋鹿国家级自然保护区提供。将刨片后的麋鹿角加8 倍量纯化水回流提取3 次,每次8h,滤过,合并滤液,减压浓缩至适当体积( 0. 5g 生药/ml) ,得麋鹿角水提物。将水提取后的残渣烘干,粉碎,过100 目筛,得麋鹿角药渣。另将麋鹿角刨片、粉碎成约100 目粉末,得麋鹿角粉。药渣和粉用0. 5%羧甲基纤维素钠溶液配制成所需浓度的混悬液备用。注射用氢化可的松琥珀酸钠( 天津生物制药有限公司, 50mg /瓶,批号: 12020493) ,金匮肾气丸( 北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂,批号: 11020147) 。
  1. 2 动物SD 大鼠,清洁级,体重180-220 g,雄性,由浙江省动物中心提供,许可证号: SCXK( 浙) 2008-0033。
  1. 3 仪器PowerWaveX340 型酶标仪( 美国BIO-TEK 公司) 。
  1. 4 试剂cGMP、CORT、E2、T 酶联免疫分析试剂盒( ENZOLife Sciences 公司提供) ; ATCH、cAMP、lgG、lgM、T3、T4、TSH 酶联免疫检测试剂盒( 南京建成生物工程研究所提供) 。
  1. 5 方法大鼠72 只,随机分为9 组,每组8 只,雄性,分为正常对照组、模型组、阳性对照药、麋鹿角粉、水提取物及药渣组。麋鹿角各给药组分别设低剂量组1g 生药/kg 和高剂量组2g 生药/kg,阳性组为金匮肾气丸2 g /kg,正常对照组和模型组给予等量蒸馏水,1次/d,灌胃给药28 天。给药第15 天开始,模型组、阳性药组和各给药组大鼠按25 mg /kg 给予氢化可的松肌肉注射造模,1次/d,连续肌注14 d,正常对照组肌肉注射相应剂量的生理盐水。
  1. 5. 1 给药期间大鼠体重测定记录大鼠的初始体重和末次给药前的体重。
  1. 5. 2 大鼠的脏器系数测定末次给药24h 后,大鼠眼眶静脉取血,37℃水浴放置30 min 后3000 rpm 离心,取上清,置于-80℃冰箱待用。取血后拉脱颈椎处死,迅速取肾脏、胸腺、脾脏,电子天平精密称量质量,计算脏器系数( 脏器质量/体质量) 。
  1. 5. 3 血液中各项指标的测定酶联免疫法检测血清中促肾上腺皮质激素( ACTH ) 、甲状腺素( T4) 、3,5,3- 碘甲状腺原氨酸( T3) 、促甲状腺激素( TSH) 、皮质醇( CORT) 、睾酮( T ) 、雌二醇( E2) 、免疫球蛋白G( lgG) 、免疫球蛋白M( lgM) 、环磷酸腺苷( cAMP) 以及环磷酸鸟苷( cGMP) 水平。
  2 结果
  2. 1 麋鹿角不同部位对阳虚模型大鼠体重的影响与正常对照组相比,模型组大鼠体重增重显著降低,麋鹿角各给药组体重增重亦均有不同程度下降,说明造模成功。与模型组比较,各给药组的体重增重显著增加,说明各给药组在改善模型大鼠体重方面均具有一定作用。其中麋鹿角粉1 g /kg、水提物1 g /kg和药渣2g /kg 剂量组具有显著的改善体重作用。
  2. 2 麋鹿角不同部位对肾阳虚模型大鼠内分泌系统的影响
  2. 2. 1 麋鹿角不同部位对肾阳虚模型大鼠血清中CORT 和ATCH 水平的影响与模型组比较,各给药组大鼠血清中CORT和ATCH 水平均有不同程度的升高。其中麋鹿角粉和麋鹿角药渣组中的CORT 水平明显升高。与模型组比较,阳性药对照组、麋鹿角粉、麋鹿角药渣及麋鹿角水提物2g /kg 剂量组血清中ATCH 水平显著升高。
  2. 2. 2 麋鹿角不同部位对肾阳虚模型大鼠甲状腺功能的影响各给药组血清中的T3、T4 水平较模型组有不同程度的升高,TSH 水平较模型组有一定的降低趋势。阳性对照组对血清中的T3、T4、TSH 均有较好的调节作用,各指标水平趋向于正常对照组。麋鹿角水提物2g /kg 和1 g /kg 剂量组大鼠血清中的T3、T4水平均较模型组明显升高,而TSH 水平显著降低,有统计学意义。麋鹿角粉2g /kg 和1 g /kg 均对大鼠血清中的T3、T4、TSH水平有一定的调节作用,但统计学意义不明显。麋鹿角药渣2g /kg、1 g /kg 剂量组较模型组大鼠血清中的T3、T4 水平均升高,除麋鹿角药渣1 g /kg 剂量组T3 外均有统计学差异,两组大鼠血清中TSH 水平降低。
  2. 2. 3 麋鹿角不同部位对肾阳虚模型大鼠性激素水平的影响阳性对照组和各给药组血清中T 含量均高于模型组,其中麋鹿角粉1 g /kg 剂量组和阳性对照组对血清T 的调节作用最显著。麋鹿角粉组于1 g /kg 和麋鹿角水提物组于1 g /kg 对血清T的调节作用均优于其于2g /kg、1 g /kg。与模型组比较,麋鹿角粉1 g /kg 剂量组大鼠血清中E2 的含量明显降低( P ﹤ 0. 01) ,麋鹿角药渣组1 g /kg、麋鹿角粉1 g /kg 和麋鹿角水提物2g /kg剂量组大鼠血清中E2 的含量有明显降低趋势,差异有统计学意义( P ﹤ 0. 05)。
  2. 3 麋鹿角不同部位对阳虚模型大鼠免疫系统的影响
  与模型组比较,麋鹿角各给药组均能升高大鼠血清中的IgG 水平,且除粉1g /kg 外具有统计学意义。但麋鹿角各给药组能升高大鼠血清中的IgM 水平,但无统计学意义。与正常对照组比较,模型组胸腺、脾脏指数和肾脏指数均降低,其中胸腺、脾脏指数具有显著地统计学意义,而肾脏指数无统计学意义。与模型组比较,阳性对照组胸腺指数、脾脏指数和肾脏指数均升高,但仅胸腺指数具有统计学意义。各给药组较模型组的胸腺指数均有显著升高,均具有统计学意义。麋鹿角药渣2g /kg 和麋鹿角水提物2g /kg 的脾脏指数较模型组升高,差异有统计学意义。麋鹿角药渣2g /kg、1 g /kg 和麋鹿角水提物2g /kg、1 g /kg 的肾脏指数较模型组升高,差别均具有统计学意义。
  2. 4 麋鹿角不同部位对阳虚模型大鼠血液中环核苷酸指标的
  影响模型组大鼠血清中的cAMP 水平低于正常对照组,而cGMP 水平较正常对照组显著升高, cAMP/cGMP 明显低于正常对照组。与模型组比较,阳性对照组cAMP 和cAMP/cGMP 水平均升高, cGMP 水平降低。各给药组中cAMP 水平较模型组均升高,除麋鹿角药渣于1 g /kg 外差异均具有统计学意义。各给药组cGMP 水平均低于模型组,仅麋鹿角粉于1 g /kg 和麋鹿角水提物于1 g /kg 具有显著性差异。各给药组cAMP/cGMP 水平较模型组均升高,除麋鹿角粉于2g /kg 和水提物于2g /kg 外,其他给药组均具有统计学意义。
  3 讨论
  近年来,研究表明麋鹿角具有抗衰老、抗氧化、增强免疫、改善性功能和补阴等作用,但对麋鹿角壮阳传统功效的药理学研究尚未进行系统的探讨。本文为了验证麋鹿角的补阳功效,从多角度、多层次、多环节探讨了麋鹿角不同部位对肾阳虚模型大鼠的作用。
  大量研究结果表明,下丘脑细胞损害和功能紊乱是肾阳虚证的主要病理基础,因其损害而致下丘脑-垂体-肾上腺轴、甲状腺轴、性腺轴不同程度的功能紊乱,同时其代谢器官、免疫系统也出现功能及病理的改变。在通过对给予麋鹿角不同部位治疗的大鼠的各项指标测定结果分析,发现麋鹿角不同部位均具有改善体重增重的效果。肾阳虚证大鼠血清中的CORT、ATCH、T3 和T4 降低,血清中的T 含量降低,E2和TSH 含量升高,而麋鹿角各治疗组与模型组结果分析比较,发现在调节肾阳虚大鼠血清中内分泌的各项激素水平方面,各治疗组表现出能不同程度上调节肾阳虚内分泌系统激素水平,说明麋鹿角能一定程度上纠正下丘脑-垂体-靶腺轴( 肾上腺皮质轴、甲状腺轴、性腺轴) 的功能紊乱状态。其次,在体液免疫方面,模型组大鼠血清中lgG、lgM 下降,且能使胸腺、脾脏及肾脏重量不同程度减轻,而粉、水提物和药渣治疗组均能促进大鼠体液免疫和免疫脏器指数的恢复,水提取物治疗组对体液免疫的作用优于药渣组和粉组,其中麋鹿角水提取物2g /kg 表现出较好的增强体液免疫的能力。此外,肾阳虚症大鼠体内cAMP 低于正常值,而cGMP 高于正常值,而cAMP/cGMP 比值变小,在本实验中,各给药组cAMP 含量高于模型组,而cGMP 含低于模型组,cAMP/cGMP 比值明显高于模型组。其中麋鹿角药渣2g /kg 能较好的调节大鼠血液中cAMP、cGMP 含量及平衡cAMP/cGMP 比值水平,其阳气受损程度低于粉组和水提物组。
  综上所述,麋鹿角能明显改善氢化可的松致大鼠肾阳虚症状,其补阳功效与调节机体的内分泌、免疫系统和血液中的环磷酸苷水平密切相关。研究结果显示,麋鹿角不同部位不同剂量均可使肾阳虚证的症状不同程度地向正常状态转归。综合各个指标的改善程度来看,药渣组要优于粉组和水提取物组,这也表明麋鹿角的补阳功效物质可能多集中于水提取后的药渣中,其中麋鹿角药渣2g /kg 表现出对肾阳虚证大鼠显著的治疗效果。本研究对麋鹿角补阳功效物质基础及其作用机制进行了初步探讨,进一步验证了麋鹿角的传统功效,为麋鹿角药用资源的科学合理开发利用奠定了基础。

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